培養(yǎng)基的配制

  培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，現(xiàn)配現(xiàn)用。

  培養(yǎng)基的配制

  1.配料

  配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水，自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水量(一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋)。

  2.溶解

  淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀

  加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。

  3.調(diào)PH

  用1N的鹽酸或1N的 NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。

  4.過濾

  濾紙或棉花進(jìn)行過濾。(有時可以省去)

  5.分裝

  一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。

  (1)三角瓶

  若作靜置培養(yǎng)，則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，較多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的

  三角瓶，否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞，造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng)，則15-20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶，保證通氣良好。

  (2)試管分裝

  液體培養(yǎng)基一般裝4-5ml，約試管的1/4高度;

  固體斜面培養(yǎng)基一般裝3-4ml，約試管的1/5高度。

  6.包扎

  分裝好后，塞上棉塞，在用牛皮紙將棉塞包裹好，防止滅菌時水份進(jìn)入把棉塞弄濕。

  7.滅菌

  按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高，營養(yǎng)成分會被破壞，培養(yǎng)

  基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。

  8.擺斜面

  滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放，使其凝固成為一個斜面，約占試管長度的1/2。

  9.貯存

  培養(yǎng)基在30℃下放置一整天，無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用